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發(fā)布時間:2021-02-19

     沙門氏菌是世界上食源性腹瀉最常見的病原菌之一。全球每年估計發(fā)生13億因沙門氏菌導(dǎo)致的急性腸胃炎病例,其中300萬患者死亡。我國沙門氏菌食物中毒多年來居細(xì)菌性食物中毒的首位,英國吉百利巧克力事件、美國的花生醬事件、匈牙利400多人甜食中毒事件等等,均是沙門氏菌污染所致,引起了各國重視,并將其列為出入境檢驗檢疫的法定檢查項目。

沙門氏菌簡介
  沙門氏菌屬是一群革蘭氏陰性、需氧型、無芽孢桿菌;本菌屬種類繁多,抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜,目前已發(fā)現(xiàn)2500多個血清型。廣泛存在于自然界中,沙門氏菌對禽類、生豬及其鮮肉制品的感染率最高,蛋類、禽類肉制品和豬肉是人類感染沙門氏菌的主要渠道。
 
沙門氏菌在水中可生存2-3周,冰箱中可生存3-4個月,在自然環(huán)境的糞便中可存活1-2個月。沙門氏菌最適繁殖溫度為37℃,在20℃以上即能大量繁殖,因此,低溫儲存食品是一項重要預(yù)防措施。

 沙門檢測之BS瓊脂
    瓊脂為必選的選擇性分離培養(yǎng)基,選擇性強(qiáng),可抑制革蘭氏陽性菌和大腸埃希氏菌。

  該培養(yǎng)基中蛋白胨、牛肉膏為細(xì)菌生長提供所需的氮源、營養(yǎng)物質(zhì)等;葡萄糖作為碳源;磷酸氫二鈉為培養(yǎng)基緩沖劑;煌綠和亞硫酸鈉可抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽性菌的生長,但對沙門氏菌的生長無影響;傷寒沙門氏菌和其他沙門氏菌可利用葡萄糖,將亞硫酸鹽還原成硫化物并與硫酸亞鐵反應(yīng)使得菌落呈黑色,同時將鉍離子還原成金屬鉍使菌落呈現(xiàn)金屬光澤;瓊脂為凝固劑。

  培養(yǎng)基配制注意事項:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性;宜于當(dāng)天配置第二天使用,配置后平板為淡綠色不透明的凝膠狀固體。

BS瓊脂培養(yǎng)基質(zhì)量要求

  在GB4789.28-2013 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求中關(guān)于亞硫酸鉍瓊脂(BS)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為:

  自本實驗室中選取11株沙門氏菌在TSB肉湯中活化后接種于BS瓊脂平板,36℃±1℃培養(yǎng)40h-48h觀察不同沙門氏菌的菌落形態(tài),是否均產(chǎn)生金屬光澤。

  具體沙門氏菌菌株如下

  置于36℃±1℃,培養(yǎng)40h時觀察產(chǎn)生金屬光澤的情況。

  經(jīng)觀察,以上11株沙門氏菌培養(yǎng)后為黑色或灰綠色菌落,均產(chǎn)生明顯的金屬光澤,不同菌株的菌落形態(tài)略有差異,回收率均在87%以上。

  具體沙門氏菌菌落形態(tài)參考下圖:



 

  本培養(yǎng)基要求抑制大腸埃希氏菌,避免對沙門氏菌的分離產(chǎn)生干擾;同時抑制革蘭氏陽性菌-糞腸球菌,故自實驗室中選取5株大腸埃希氏菌和7株糞腸球菌進(jìn)行驗證。

 

  36℃培養(yǎng)40h后計數(shù)生長指數(shù)G值,結(jié)果如下:

 

  經(jīng)試驗驗證,5株大腸埃希氏菌和7株糞腸球菌均被抑制。

  亞硫酸鉍瓊脂(BS)(產(chǎn)品號:12C04)平板上生長的多株沙門氏菌的菌落形態(tài)典型,可產(chǎn)生明顯的金屬光澤,易與其他雜菌區(qū)分。在進(jìn)行沙門氏菌檢測的過程中,同時需要與其他選擇性分離平板(如XLDHE或沙門氏菌顯色培養(yǎng)基)上分離的典型和可疑菌落純化后進(jìn)行后續(xù)的生化與血清學(xué)鑒定,綜合分析判斷是否為沙門氏菌。

原文鏈接:
研究進(jìn)展 || 多株沙門氏菌在亞硫酸鉍瓊脂(BS)上的生長情況。

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